分子荧光光谱法实验报告范文

一、实验目的

1.掌握荧光光度计的基本原理及使用。

2.了解荧光分光光度计的构造和各组成部分的作用。

3.掌握分子荧光光度计分析物质的特征荧光光谱：激发光谱、发*光谱的测定方法。

4.了解影响荧光产生的几个主要因素。

5.学会运用分子荧光光谱法对物质进行定*和定量分析。

二、实验原理

原子外层电子吸收光子后，由基态跃迁到激发态，再回到较低能级或者基态时，发*出一定波长的辐*，称为原子荧光。对于分子的能级激发态称为分子荧光，平时所说的荧光指分子荧光。

具有不饱和基团的基态分子经光照*后，价电子跃迁产生荧光，是当电子从第一激发单重态S1的最低振动能级回到基态S0各振动能级所产生的光辐*。

(1)激发光谱

是指发光的某一谱线或谱带的强度随激发光波长(或频率)变化的曲线。横坐标为激发光波长，纵坐标为发光相对强度。

激发光谱反映不同波长的光激发材料产生发光的效果。即表示发光的某一谱线或谱带可以被什么波长的光激发、激发的本领是高还是低；也表示用不同波长的光激发材料时，使材料发出某一波长光的效率。荧光为光致发光，合适的激发光波长需根据激发光谱确定——激发光谱是在固定荧光波长下，测量荧光体的荧光强度随激发波长变化的光谱。获得方法：先把第二单*器的波长固定，使测定的λem不变，改变第一单*器波长，让不同波长的光照在荧光物质上，测定它的荧光强度，以I为纵坐标，λex为横坐标所得图谱即荧光物质的激发光谱，从曲线上找出λex，，实际上选波长较长的高波长峰。

(2)发*光谱

是指发光的能量按波长或频率的分布。通常实验测量的是发光的相对能量。发*光谱中，横坐标为波长（或频率），纵坐标为发光相对强度。

发*光谱常分为带谱和线谱，有时也会出现既有带谱、又有线谱的.情况。发*光谱的获得方法：先把第一单*器的波长固定，使激发的λex不变，改变第二单*器波长，让不同波长的光扫描，测定它的发光强度，以I为纵坐标，λem为横坐标得图谱即荧光物质的发*光谱;从曲线上找出最大的λem。

(3)荧光强度与荧光物质浓度的关系

用强度为I0的入*光，照*到液池内的荧光物质时，产生荧光，荧光强度If用仪器测得，在荧光浓度很稀(A<0.05)时，荧光物质发*的荧光强度If与浓度有下面的关系：If=KC。

三、实验试剂和仪器

试剂：罗丹明B乙醇溶液；1-萘*乙醇溶液；3,3’-Diethyloxadicarbocyanineiodide：标准溶液，10μg/ml,20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml和未知浓度；蒸馏水；乙

醇。

仪器：Fluoromax-4荧光分光光度计；1cm比*皿；spectrofluorometer分析软件。

荧光分析仪器结构：它主要由光源、单*器、液槽、检测器和显示器组成。光源发出的紫外-可见或者红外光经过激发单*器分光后，照到荧光池中的被检测样品上，样品收到该激发光照*后，发出的荧光经发*单*器分光，由光电倍增管转换成相应电信号，再经放大器放大反馈进入转换单元，将模拟电信号转换成相应数字信号，并通过显示器或打印机显示和记录被测样品谱图。

四、实验步骤

1.样品制备。配置不同浓度的3,3’-Diethyloxadicarbocyanineiodide溶液，分别为10μg/ml,20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml和未知浓度。

2.打开荧光分光光度计和电脑，预热半个小时。

3.打开spectrofluorometer分析软件，进行相关参数的设置。首先检测罗丹明B的激发光谱，此时固定发*波长为560nm，检测并保存激发光谱。然后根据所检测的激发光谱中的最大峰值541nm来设置检测罗丹明B的荧光光谱的激发波长，检测并保存所得的荧光光谱。

4.检测1-萘*的荧光光谱。方法同步骤3。

5.用已配置好的3,3’-Diethyloxadicarbocyanineiodide标准溶液进行与2中相同的步骤，找到最大激发波长与最大发*波长，之后选定单点检测模式，并设置成刚选择的最大激发波长与最大发*波长，分别对10μg/ml,20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml进行检测，记录数据，绘制工作曲线。

6.对未知浓度3,3’-Diethyloxadicarbocyanineiodide进行检测，记录数据，并根据工作曲线求出浓度。

五、数据记录和处理

1．数据记录

(1)罗丹明B的测定

图2.罗丹明B的激发光谱

图3.罗丹明B的荧光光谱

【分子荧光光谱法实验报告范文】相关文章：

1.低分子聚*烯**实验报告范文

2.数独实验报告范文

3.精馏实验报告范文

4.tracepro实验报告范文

5.科技实验报告范文

6.SRDP实验报告范文

7.实验报告格式范文

8.中医实验报告的范文

• 原子荧光光谱法分析煤中的锗

  将Ge含量在10～50ng/mL的Ge标准溶液转化为GeCl4后用CCl4两次萃取1次纯水反萃取,用原子荧光光谱法测定,Ge的回收率在97.2%以上,标准工作曲线的相关系数达0.999以上.在处理试样时,用HF-HNO3-HClO4于高压消...

• 太湖水荧光光谱分析

  利用SP-2558多功能光谱测量系统,对太湖水、普通自来水和纯水在紫外光激励下产生的荧光光谱及其特*进行了实验研究.结果表明,太湖水在波长290nm左右的紫外光激励下能产生较强的荧光.荧光峰是360nm至510nm范围的宽谱峰,荧光峰值波长...

• 农*荧光全光谱检测与分析系统研究

  基于有机物农*的荧光机理,利用光纤传感技术、光栅分光技术和多通道图像传感器(Multi-ChannelImageSensor)技术提出了一种用于有机农*的荧光全光谱检测与分析系统.系统以脉冲氙灯为激发光源,采用光纤进行传输和探测荧光,以自制...

• 荧光光谱法检测非水体系中蒽和芘

  用荧光光谱法检测建立了非水体系中蒽和芘的测试方法,蒽和芘的检测线*范围分别为5.6×10-9-2.8×10-6mol/L和4.9×10-8-1.47×10-6mol/L,相关系数为0.99959和0.99822,检出限分别为0.356ng/...

• 杨氏实验远场的光谱位移和光谱开关

  从部分相干光的传输定律出发,研究了杨氏双缝实验远场的光谱变化.指出杨氏实验中光谱开关在远场也会出现.缝的衍*和光的空间相干*是产生光谱开关的物理原因,增大缝参量ε和源的空间相关度Δ光谱开关效应越显著.作了详细的数值计算以说明远场光谱位移和光...