结缔组织生长因子小干扰RNA的构建及其干扰效果检测

目的:构建结缔组织生长因子(CTGF)基因的小干扰RNA(siRNA),并检测其对CTGF基因表达的干扰效果.方法:根据CTGF基因序列,设计2条合理的CTGF-siRNA,并将其克隆到siRNA载体pSliencer2.1-U6neo中,转化大肠杆菌DH5a,挑取阳*菌落进行酶切和测序鉴定;将构建成功的CTGF-siRNA重组质粒与带FLAG标签的CTGF表达载体共同转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测siRNA的干扰效果.结果:构建了2个CTGF-siRNA重组质粒,2条siRNA都有干扰作用,其中一条的干扰效果可达75%以上.结论:构建的CTGF-siRNA可为进一步研究CTGF的功能提供参考.

郑喜邦,ZHENGXi-Bang(广西大学,动物科学技术学院,广西,南宁,530005)

王晓晖,杨智洪,姜艳超,丁丽华,李杰萍,叶棋浓,WANGXiao-Hui,YANGZhi-Hon,JIANGYan-Chao,DINGLi-Hua,LIJie-pin,YEQi-Nong(*事医学科学院,生物工程研究所,*,100850) 

• Spl基因RNA干扰载体的构建及鉴定

  目的:构建干扰载体pSilencer3.1-spl,并初步研究其对Spl基因的干扰作用.方法:根据SplcDNA编码序列,设计并合成针对Spl基因的特异*RNA干扰片段,并将其克隆入pSilencer3.1-Hlneo干扰载体中,构建Spl...

• 介导大鼠结缔组织生长因子基因沉默的慢病毒载体转移质粒的构建及鉴定

  目的:构建介导大鼠结缔组织生长因子(CTGF)基因沉默的慢病毒载体转移质粒pGCL-CTGF,为进一步包装慢病毒载体奠定基础.方法:以大鼠CTGF基因为靶基因,根据RNA干扰(RNAi)序列设计原则,设计4对有小发夹结构的RNAi靶点序列,...

• 干扰测试小故事

  那就是无论干什么都要钻下去，在各种干扰面前心无旁骛，始终如一，100%投入到工作中。一家工厂在报纸上招聘质检员，刚失业的我决定报名。通过初试后，三天后我又迎来复试。复试现场来了20多人，而公司只录用4人，我想，一定是公司的名气以及那过得去的...

• RNA干扰载体活体内耳转染的可行*

  目的:初步探讨RNAi技术应用于活体动物内耳的可行*.方法:实验分为2组,左耳为手术耳,右耳为内部对照耳.手术中将阳离子聚合物混合的RNAi质粒载体通过手术于圆窗注入,测量手术前及术后1、3、7d载体表达及畸变产物耳声发射和听*脑干反应以判...

• RNA干扰介导原核细胞适应*免疫

  RNA干扰广泛存在于真核细胞中,其作用机制已得到比较清楚阐明.虽然在原核细胞中已发现微小RNA(miRNA)参与的基因沉默调节细菌基因表达,但尚未发现小干扰RNA(siRNA)参与的基因沉默机制.近年在原核细胞基因组中发现一类新的成簇的规律...