人TBK1小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰TBK1细胞株的筛选

目的:构建人TANK结合激酶1(TBK1)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰TBK1的细胞株.方法:根据文献报道的序列和载体的黏*末端,设计合成2条针对TBK1的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo+gfp上,经测序分析正确后得到质粒psiTBK1.用脂质体转染质粒psiTBK1到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达TBK1小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中TBK1的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siTBK1,再用萤光素酶试验检测MCF-7/siTBK1细胞对外源TBK1诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况.结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF-7/siTBK1能够有效干扰TBK1的表达,并在外源TBK1存在的情况下抑制IFN-β的转录活*.结论:构建了表达TBK1小干扰RNA的质粒psiTBK1,筛选出稳定干扰,IBK1表达的细胞株MCF-7/siTBK1,为深入研究TBK1在先天免疫中的作用提供了平台.

魏从文,宋婷,张艳红,钟辉,WEICong-Wen,SONGTing,ZHANGYan-Hong,ZHONGHui(*事医学科学院,生物工程研究所,*,100850)

管楷,程孝中,袁媛,尹晴晴,GUANKai,CHENGXiao-Zhong,YUANYuan,YINQing-Qing(*事医学科学院,生物工程研究所,*,100850;安徽大学,生命科学院,安徽,合肥,230039)

徐扬,郑子瑞,XUYang,ZHENGZi-Rui(*事医学科学院,生物工程研究所,*,100850;吉林大学,分子酶学工程实验室,吉林,长春,130012) 

• RNA干扰

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• CDC6靶向RNA干扰质粒载体的构建及生物活*鉴定

  目的:构建小鼠CDC6基因的RNAi真核表达载体PGCsilencerTMU6/Neo/GFP/RNAi,观察其转染小鼠肝细胞前后CDC6的表达变化.方法:根据GenBank中CDC6的序列,设计特异*siRNA序列,将模板序列克隆至PGC...

• Spl基因RNA干扰载体的构建及鉴定

  目的:构建干扰载体pSilencer3.1-spl,并初步研究其对Spl基因的干扰作用.方法:根据SplcDNA编码序列,设计并合成针对Spl基因的特异*RNA干扰片段,并将其克隆入pSilencer3.1-Hlneo干扰载体中,构建Spl...

• RNA干扰介导原核细胞适应*免疫

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• 结缔组织生长因子小干扰RNA的构建及其干扰效果检测

  目的:构建结缔组织生长因子(CTGF)基因的小干扰RNA(siRNA),并检测其对CTGF基因表达的干扰效果.方法:根据CTGF基因序列,设计2条合理的CTGF-siRNA,并将其克隆到siRNA载体pSliencer2.1-U6neo中,...