裂解基因E和核*酶基因串联表达载体的构建及大肠杆菌菌影的制备

目的构建噬菌体裂解基因E和核*酶基因串联表达载体,制备高质量的大肠杆菌菌影.方法自行设计一对引物,PCR扩增PhiX174噬菌体裂解基因E,将该基因亚克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建大肠杆菌菌影的表达载体pGEX-E.在E基因基础上与辅助基因葡萄球菌核*酶A(SN)基因串联,并*pGEX-6P-1载体,构建双基因串联高效表达载体pGEX-E-5aaLinker-SN和pGEX-E-15aaLinker-SN,采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,制备大肠杆菌菌影.结果裂解基因E单基因及串联基因已成功*融合表达载体pGEX-6P-1,所构建的大肠杆菌菌影表达载体pGEX-E、pGEX-E-5aaLinker-SN和pGEX-E-15aaLinker-SN,诱导后经透射电镜及活菌计数显示大肠杆菌已发生不同程度裂解,制成了大肠杆菌菌影.电镜下菌影形态完整,内容物已释放到胞外.结论已成功构建了噬菌体裂解基因E单基因及裂解基因和核*酶基因串联基因表达载体,并制成了大肠杆菌菌影,为进一步研究菌影这一新型的疫苗及佐剂形式奠定了基础.

• 几丁质酶基因表达载体pET-chiB的构建及其在大肠杆菌中的诱导表达

  几丁质酶在降解几丁质的过程中起着重要作用,目前人们已从不同微生物体中分离并克隆出了多种几丁质酶基因.实验以pET-22b(+)为载体,利用从粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)克隆出的chiB基因,构建出原核生物表达载体pE...

• 核盘菌EPSP合酶基因在大肠杆菌中的表达

  不含有内含子的核盘菌arom基因已经被扩增、测序.该基因编码五功能的AROM蛋白.为了大量获得核盘菌AROM蛋白的结构域之一5-烯醇**酰莽草*-3-**合酶(EPSPS),将该菌arom基因编码脱*奎尼*合酶(DHQS)和EPSPS两结构...

• 重组大肠杆菌共表达D-海因酶和N-氨甲酰基-D-氨基*酰*水解酶

  通过PCR分别扩增得到N-carbamoylase基因和上游带有RBS区的D-hydantoinase基因,并将其依次克隆入pBAD/HisA质粒中,得到呈多顺反子结构的双酶表达质粒pBAD-CRH,转化E.coliTop10F'得到重组菌...

• 脉胞菌hH3v基因的初步研究及原核表达载体构建

  根据植物表达栽体pET52(b)多克隆住点和脉胞菌着丝粒结构相关蛋白CenH3的编码基因hH3v序列,设计引物,通过PCR扩增将基因两端加上KpnⅠ和SacⅠ酶切住点,经双醇切后将hH3v*表达载体pET52(b)中,利用热激法转化大肠杆...

• 嗜*乳杆菌推定的β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的功能*表达

  目的在大肠杆菌中诱导表达以嗜*乳杆菌克隆β-半乳糖苷酶基因lacZ,为研究其酶学特*做准备.方法从嗜*乳杆菌ATCC4356中克隆lacZ基因,并构建表达载体pET22b-lacZ-H、pQE31-H-lacZ和pQE31-lacZ,然后在...