γ-谷氨酰转肽酶酶学*质的研究

【摘要】 目的了解地衣芽孢杆菌菌体细胞中γ-谷氨酰转肽酶的一些基础酶学*质。方法采用溶菌酶法破碎细胞壁，经硫*铵沉淀后透析得到粗酶后，采用紫外分光光度法测定该酶的酶活力。结果该酶在25~35℃的温度范围有很好的耐受*，在碱*条件下保持一定的活*，最适反应温度为45℃，最适反应pH值为8.0，Ca2+、Mg2+等金属离子在适当浓度时对酶活*有促进作用。结论本实验为利用该酶转化生产茶氨*提供了依据。

【关键词】 γ-谷氨酰转肽酶;酶学*质;茶氨*

Abstract:ObjectiveTounderstandsomebasicpropertiesofγ-glutamyltranspeptidasefromBacilluslicheniformis.MethodsLysozymewereusedtodisruptthecellwallandammoniumsulfatewereusedtoseparateprecipitationanddialysis,atlastthecrudeenzymewereobtained.UVspectrophotometrywereusedtomeasuredtheenzymeactivity.ResultsThisenzymewaswelltoleranttotemperatureintherangeof25~35℃,butinalkalineconditions,itmaintainedacertainactivity,theoptimumreactiontemperaturewas45℃andoptimumreactionpH8.0,generallytheappropriateconcentrationofmetalions,suchasCa2+,Mg2+,hadapositiveeffectontheactivity.ConclusionThisexperimentcouldbeusedinproductionoftheaninewithγ-glutamyltranspeptidase.

Keywords:γ-glutamyltranspeptidase;enzymologicalproperty;L-theanine

1材料与方法

1.1主要材料与试剂

菌种：地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)由本实验室筛选获得。试剂：Tris购自*普博欣生物公司;L-γ-谷氨酰对*基苯*、双甘肽均购自广州威佳科技有限公司;硫*铵为国产分析纯。

1.2地衣芽孢杆菌的产酶发酵

用接种环在活化好的菌种斜面上刮下一环菌种，将其转入到种子培养基，30℃、240r/min摇床振荡培养16h。以20%接种量转接于发酵培养基(30mL发酵液/300mL三角瓶)中，在30℃下240r/min摇床培养28h后收集菌体。

1.3γ-GTP粗酶的制备

γ-GTP发酵瓶培养液离心(4800r/min,10min)，弃上清液，用TE缓冲液(Tri-HCl缓冲液,pH8.0，10mol/L)重悬菌体,采用溶菌酶法以及硫*铵盐析法制备粗酶液。

1.4酶对温度的耐受* 

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