方正银鲫微卫星序列的筛选及PCR扩增产物的初步检测

采用小片段克隆法构建了方正银鲫[(Carassiusauratusgibelio(Block)]部分基因组文库,并采用非影印的方法将转化子转移到**纤维素滤膜上.用人工合成、并经放射*同位素[γ-32P]ATP标记的(CA)15探针对构建的基因组文库进行筛选,获得137个阳*克隆,经测序得到微卫星序列130个,其中完美型、非完美型、混合型分别占64.3%、16.9%和18.8%.应用引物设计软件PrimerPrimer5.0进行引物设计,得到引物103对.合成30对引物,随机选取其中5对进行PCR扩增.结果表明,这5对引物均可以稳定扩增,并且观测杂合度均较高.

梁利群,孙效文,LIANGLi-qun,SUNXiao-wen(*水产科学研究院,黑龙江水产研究所,农业部北方鱼类生物工程育种重点开放实验室,黑龙江,哈尔滨,150070) 

• 磁珠富集法筛选虾夷扇贝微卫星序列

  采用生物素-磁珠吸附微卫星富集法,筛选虾夷扇贝(Patinopectenyessoensis)微卫星分子标记,并用同位素法进行二次筛选.结果在筛选的192个菌落中获得136个阳*克隆,经测序分析,获得微卫星序列179个,其中完美型占50.8...

• PRRSV GP5基因RT-PCR扩增方法的建立

  猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的糖蛋白GP5含有中和表位,是检测用抗原和亚单位疫苗的首选蛋白.本实验参考GenBank发表的以及本实验室分离鉴定的PRRSV基因序列,在GP5的两端的保守区设计并合成了一对引物,建立了一种PRRSV的R...

• 獐ISSR-PCR反应体系的建立与优化及引物筛选

  利用正交试验L16(45)对影响獐(Hydropotesinermis)ISSR-PCR反应的TaqDNA聚合酶浓度、dNTP浓度、引物浓度、Mg2+浓度及模板DNA浓度5个因素在4个水平上进行优化,同时对退火温度进行梯度PCR反应,以建立...

• 微生物絮凝剂产生菌的筛选及其培养条件研究

  用常规的分离、纯化方法,从长沙市第一污水处理厂活*污泥中分离筛选出5株产絮凝剂的菌株,复筛得到1株絮凝活*较高的微生物絮凝剂产生菌,编号为N11.以菌株N11为研究对象,测定其发酵液对高岭土悬浊液的絮凝率,得到该菌产絮凝剂的适宜培养基及培养...

• 人偏肺病毒TaqMan-MGB探针实时定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

  目的:建立人偏肺病毒(hMPV)核*特异的快速、敏感的TaqMan-MGB探针实时定量RT-PCR检测方法.方法:分别设计hMPV特异的引物与荧光标记探针,合成hMPV绝对定量RNA模板,建立实时荧光定量PCR方法,并与常规RT-PCR平行...