脐带血间充质干细胞的分离培养和鉴定

【摘要】 目的分离培养脐带血间充质干细胞并检测其生物学特*。方法在无菌条件下用密度梯度离心的方法获得脐血单个核细胞，接种含10%胎牛血清的DMEM培养基中。单个核细胞行贴壁培养后，进行细胞形态学观察，绘制细胞生长曲线，分析细胞周期，检测细胞表面抗原。结果采用Percoll(1.073g/mL)分离的脐血间充质干细胞大小较为均匀，梭形或星形的成纤维细胞样细胞。细胞生长曲线测定表明接后第5天细胞进入指数增生期，至第9天后数量减少;流式细胞检测表明50%～70%细胞为CD29和CD45阳*。结论体外分离培养脐血间充质干细胞生长稳定，可作为组织工程的种子细胞。

【关键词】 脐血;间充质干细胞;细胞周期;免疫细胞化学

           Abstract:ObjectiveIsolationandcultivationofmesenchymalstemcells(MSCs)inhumanumbilicalcordinvitro,anddeterminetheirbiologicalproperties.MethodsThemononuclearcellswereisolatedbydensitygradientcentrifugationfromhumanumbilicalcordbloodinsterilecondition,andculturedinDMEMmediumcontaining10%fetalbovineserum.Aftertheadherentmononuclearcellswereobtained,theshapeofcellswereobservedbymicroscope,thenthecellgrowthcurve,thecellcycleandthecellsurfaceantigenswereobtainedbyimmunocytochemistryandflowcytometrymethods.ResultsMSCsobtainedbyPercoll(1.073g/mL)weresimilarinsize,spindle-shapedorstar-shapedfibroblasts-likedcells.CellgrowthcurveanalysisindicatedthatMSCswereintheexponentialstageafter5dandinthestationarystagesafter9d.FlowcytometryanalysisshowedthattheCD29andCD44positivecellswereabout50%～70%.ConclusionsThehumanumbilicalcordderivedmesenchymalstemcellsweregrownstablyinvitroandcanbeusedastheseed-cellsintissueengineering.

Keywords:humanumbilicalcordblood;mesenchymalstemcells;cellcycle;immunocytochemistry

1材料与方法

1.1UCB-MSCs的分离与培养

1.2UCB-MSCs细胞表面抗原分析

分别取第1、5、9代细胞，胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液。含2%牛血清白蛋白的PBS缓冲液冲洗细胞，室温下分别与CD29-PE、CD34-PE、CD44-PE及CD45-PE单克隆抗体避光孵育15min。PBS缓冲液冲洗细胞，离心，弃上清。加入含1%多聚甲醛的PBS缓冲液0.3mL，使用同型对照单克隆抗体确定背景标记，流式细胞仪分析细胞表面抗原。

1.3UCB-MSCs体外增殖能力检测 

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